Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中慢慢扩展

从第一次用到口内自身HIV到用到1同型肾病临床研究工作呕吐的十分困难率在幼儿初就有很差的所述，多个口内自身HIVHIV的幼儿里面有70%在血清转换后10年末患上肾病，而随访15年的幼儿这一一般而言增加到84%。相较之下，占临床研究工作1同型肾病一半以上的同型1同型肾病的胃癌前提还不能受益充分的研究工作。

越来越多的人开始使用分期管理系统来界定1同型肾病的十分困难：幼微在用到多种口内自身HIV时转至第1过渡阶段，用到血糖极度时转至第2过渡阶段，用到呕吐时转至第3过渡阶段。一些多发口内自身HIVHIV的幼微，在1期和2期，十分困难很比较慢，并发展为胃癌的1同型肾病。我们此前所述了一四组在首次检测到多种口内自身HIV结果揭示后仅仅10年无肾病的亦然比较慢十分困难者，这四组呕吐人数少，但形态更为清楚。随后，我们推测口内自身免疫免疫CD8+T细胞膜反不宜会在十分困难平稳的呕吐里面基本不存在，但在近来胃癌和近十年存在的肾病呕吐里面很容易检测到。这可能表明，与十分困难呕吐相较，这些呕吐性疾病反不宜会的调控增强。

早期研究工作表明，尽管调控性T细胞膜(Treg)数量正常，但肾病呕吐存在一些机能缺陷，其里面包括对IL-2的反不宜会意志力增加。此外，肾病呕吐里面的效不宜CD4+T细胞膜可能对调控更为重要抵抗性，观感为效不宜T细胞膜的诱发减弱，自然消除的Treg和微外消除的抑止Treg，以及免疫经历的CD4+T细胞膜里面IL-2反不宜会减弱。本研究工作的用意是所述了CD4+调控性T细胞膜(Treg)在一小群亦然平稳十分困难者里面的形态，他们的平均年龄组为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX研究工作是一项以人群为基础的纵向研究工作，在21岁以下确诊的呕吐亲属里面检查1同型肾病的脆弱原因。我们此前所述了近十年平稳十分困难者的形态，他们保持良好多重口内自身HIVHIV超过10年，但不能用到肾病的临床研究工作呕吐，比较慢性或非外阴性疾病。随后，10名继续保持良好无肾病并乐意透过大量血液结果揭示的平稳十分困难者纳入T和B细胞膜机能分析。在目前的研究工作里面，8名比较慢十分困难者(SP四组)，里面位年龄组43岁(31-72岁)，18 - 32岁相互间的口内自身HIVHIV。所有的参与者都所处1同型肾病十分困难的1期，尽管一些人随后失去了口内自身HIV对某些免疫的HIV反不宜会，然而，一名呕吐已经所处2期仅仅6年，但不能用到临床研究工作呕吐，一名呕吐被诊断为肾病，该受试者72岁，在采自实验结果揭示时，其HbA1c下降时到53 mmol/mol(7%)，在数据分析里面对该遗传物质透过了单独风险评估。分离外周血单个核能细胞膜(PBMCs)，采用多实例流式细胞膜拳法和T细胞膜诱发测试风险评估遗传物质里面Treg的频率、表同型和机能。使用FlowSOM和CITRUS(聚类认定、比如说和回归)透过无监督聚类分析，风险评估Treg表同型。

结果：与身体健康遗传物质相较，来自比较慢十分困难微的遗忘CD4+T细胞膜的监督聚类揭示，激已逝的遗忘CD4+ Treg频率增加，与糖皮质激素抑止的TNFR相关蛋白(GITR)解读增加有关。一名HbA1c下降时的呕吐与十分困难平稳者和给定的对照四组相较，Treg谱有所有所不同。机能于数，与身体健康遗传物质相较，来自平稳十分困难微的Treg介导的CD4+效不宜T细胞膜诱发明显受损。观感为对效不宜CD4+T细胞膜CD25和CD134解读的诱发增加。

上图1 深入的表同型分析揭示，CD4+Treg亚同型在比较慢十分困难队列里面增加。由FlowSOM生成的Treg楼内，聚集在来自所有遗传物质的已逝CD4+CD45RA -细胞膜上。根据标识物解读认定成10个元簇:遗忘T细胞膜_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;遗忘T cell_4;CD49b遗忘T细胞膜;HLA-DR + GITR +遗忘T细胞膜;寄存器Treg_1;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;和寄存器Treg_4。(a)使用9个有所不同Treg标识生成的10个元簇的MST。每个节点象征性一个集群(100个集群)，更大的元集群(10个元集群)在节点四组周遭上色。每个节点里面的饼上图说明单个标识的解读级别。(b)每个元聚类的热上图，以揭示连续性标识解读。(c, d)为HD四组(c)和SP四组(d)生成上图，以及FlowSOM标识的每个元簇的大块。(e-l)相较重元素为每个metacluster箱本站上图(重元素> 0.05%)确定为HD和SP四组:寄存器Treg_2 (e),寄存器Treg_3 (f),寄存器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +遗忘T细胞膜(h)、遗忘T cell_1(i),遗忘T cell_2 (j),遗忘T cell_3 (k) n d CD49b遗忘T细胞膜(l)。橙色圆点象征性**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对记号秩检验。此键适用于上图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

上图2 使用CITRUS的预测模同型证实，Treg频率的增加是十分困难平稳的上图标。分级依赖型(a - f)和柑橘分析(g-k)比较SP参与者和给定的HD参与者在CD4+CD45RA−T细胞膜上的关联。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群微的象征性性上图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3非金属，然后通过HLA-DR和GITR解读透过分离，模拟FlowSOM群微。(b) HD(网纹)和SP(蓝点)四组以及遗传物质SP 606(橙色)里面CD25+ cd127的频率摘要上图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+依赖型空集的箱本站上图;(c) HLA-DRloGITR−(寄存器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(寄存器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(寄存器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+寄存器T cell)。(g - i)柑桔簇棒状由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3解读强度制做，箭头突成的簇被标识为SP和HD队列相互间的有所不同。(j)箱本站上图揭示了在SP(蓝点)和HD(灰点)四组里面，CITRUS遗忘Treg_3和Treg_4的相较重元素(一般而言)。(k)缩放揭示每个簇的表同型(粉红色)和Treg标识相较解读与背景解读(蓝色);上列，寄存器Treg_3;下面正要，寄存器Treg_4。背景与所有其他簇里面标识的解读有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对记号秩检验

上图3 与身体健康献血者相较，十分困难平稳者遗忘treg的GITR增加。每个遗忘CD4+T细胞膜元簇(遗忘T细胞膜_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;CD49b +遗忘T细胞膜;HLA-DR + GITR +遗忘T细胞膜;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检测每个解读标识的改变。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的解读热上图(sp606不包括在内)。(c,d)遗忘Treg_4元簇里面所有HD(白色)、所有SP(蓝色)和SP 606(橙色)的FlowSOM GITR解读串联，揭示缩放(c)和摘要上图(d)。Wilcoxon配对记号秩和检验，p< 0.07(橙色)所有遗传物质包括，p< 0.05(蓝色)遗传物质SP 606和给定的HD不包括在测试里面。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里面GITR解读，从分级依赖型，从所有HD(白色)、所有SP(蓝色)和SP 606(橙色)串联，揭示缩放(e)和摘要上图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对记号秩检验

上图4 来自平稳十分困难的CD4+ treg细胞膜掌控效不宜CD4+T细胞膜的意志力增加。SP四组用蓝色的本站和圆点说明，HD四组用黑色的本站和圆点说明，橙色的本站/圆点说明遗传物质sp606。使用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜透过分选。CD4+CD25−(；也者)被标识为CFSE, Treg按观察的一般而言校准。用抗CD3 /28微珠已逝化细胞膜，指导3天后透过流式细胞膜拳法检测。(a-d)与CD4+；也者相较不宜的treg指导(自微)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD；也者指导。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE诱发一般而言(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的诱发一般而言。使用HIV对照(激已逝的响不宜细胞膜下同treg)计数诱发一般而言。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

上图5 效不宜CD4+T细胞膜对平稳十分困难的T细胞膜已逝化的诱发更敏感。SP四组用蓝色的本站和圆点说明，HD四组用黑色的本站和圆点说明，橙色的本站/圆点说明遗传物质sp606。使用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜透过分选。CD4+CD25−(；也者)被cfsel标识，treg按观察的一般而言校准。用抗CD3 /28微珠已逝化细胞膜，指导3天后透过流式细胞膜拳法(CD25反染)和细胞膜因子分析。HD Treg与HD、SP或sp606；也者联合指导。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE诱发百份(b)。(c,d) CD25诱发百份(c)和CD134诱发百份(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共指导里面的解读。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们得成的结论是，来自平稳十分困难子的已逝化遗忘CD4+Treg在GITR解读里面受益了扩展和丰富，强调了进一步研究工作Treg在1同型肾病风险幼微里面的异质性的必要性。

原文说是：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28